Saturs

• Instrukcijas

Apmeklējot augstāka līmeņa mikrobioloģiju, jūsu skolotājs var pieprasīt, lai jūs pabeigtu projektu, kurā, izmantojot virkni testu, jums ir jāidentificē nezināma baktērija. Lai pareizi identificētu šīs baktērijas, ir nepieciešamas visas atbilstošās laboratorijas iekārtas un jāzina dažādas laboratorijas procedūras. Ir arī izdevīgi izmantot baktēriju plūsmas diagrammu un to laboratorijas testus, lai jūs varētu identificēt baktērijas.

Instrukcijas

Kultūras plāksnes ļauj izolēt baktērijas, lai viegli identificētu to īpašības (Hemera Technologies / Photos.com / Getty Images)

1. Pirms eksperimenta sākuma sagatavojiet visus testus. Tas ietver agara plākšņu un cauruļu sagatavošanu, kā arī nepieciešamo rādītāju, piemēram, Kovac reaģenta, sagatavošanu. Labi iezīmējiet visas caurules un plāksnes, lai tās nesajauktu, kā rezultātā rodas kļūdaini rezultāti.

2. Sējiet savas baktērijas. Tas noteiks Jūsu baktērijas formu un krāsu, piemēram, gram-pozitīvus (purpursarkanus), gramnegatīvus (sarkanus vai rozā), kokosriekstus (apļveida), spirocetus (spirāli) vai stieņus. Lai sētu savu baktēriju, jums būs nepieciešams tīrs asmens, ūdens, kristalizēts violets, jods, balinātājs, safranīns, absorbējošais papīrs, gaismas mikroskops un daži papīra dvieļi. Pēc cilpas ieskrūvēšanas izmantojiet to, lai uz lāpstiņa ievietotu ūdens pilienu. Atkal pievelciet cilpu un tad ievietojiet nelielu daudzumu nezināmo baktēriju ūdens pilienā. Dažas reizes pārvelciet lāpstiņu, lai žāvētu un pilnībā piestiprinātu baktērijas pie asmens. Pārklājiet to ar kristalizētu violetu, atstājiet uz minūti un pēc tam uzmanīgi nomazgājiet. Tad nosedziet asmeni ar jodu. Atstājiet uz 30 sekundēm un pēc tam nomazgājiet. Lai noņemtu lieko ūdeni, virs asmens novietojiet absorbējoša papīra gabalu. Tad ielej balinātāju uz asmens. Pēc piecām sekundēm mazgājiet, lai noņemtu balinātāju. Visbeidzot, nosedziet asmeni ar safranīnu. Pēc 40 sekundēm nomazgājiet asmeni un viegli nosusiniet ar papīra dvieli. Novietojiet baktēriju vietu uz slaida un nometiet zem mikroskopa. Ievērojiet redzamo baktēriju formu un krāsu.

   
   

3. Pārbaudiet oksidāzi jūsu baktērijās. Šim nolūkam būs nepieciešams papīra filtrs, oksidāzes reaģents, E. coli, Pseudomonas un tā nezināmās baktērijas. Šajā testā kontrolē E. coli un Pseudomonas. Baktērijai šim testam jābūt mazākam par 24 stundām. Pievelciet rokturi un ievietojiet nelielu daudzumu katras baktērijas uz papīra filtra. Izmantojiet pilinātāju, lai katrā baktērijā ievietotu vienu pilienu reaģenta oksidāzes. Pēc 10 sekundēm atzīmējiet katras baktērijas krāsu. E. coli sniegs pozitīvu rezultātu, un Pseudomonas sniegs negatīvu rezultātu. Baktērijas, kas ir pozitīvas attiecībā uz citohroma oksidāzes enzīmu, kļūs purpura, un negatīvās baktērijas nemainīs krāsu.

4. Ūdeņraža sulfīda (SIM) tests. Uzvelciet rokturi un izmantojiet to, lai no plāksnes paņemtu dažas baktērijas. Ievietojiet SIM cauruli ar baktērijām un nosedziet to. Atstāj šo mēģeni cepeškrāsnī 18 līdz 24 stundas 37 ° C temperatūrā. Atklājiet, vai jūsu baktērija ir mobilā (ir flagellums). Ja ir augšana un mākoņainība tālu no vietas, kur jūs inokulējāt baktērijas, tas ir mobils. Pēc tam ievietojiet mēģenē divus pilienus Kovac reaģenta. Ja tā krāsa ir mainījusies sarkanā vai rozā krāsā, tā baktērija ir pozitīva attiecībā uz šo testu un satur triptofānu, tādējādi tā ir indola ražotājs. Ja caurule kļūst melna, tā baktērijas ražo sērūdeņradi.

   
   

5. Veiciet Simmon citrāta testu. Baktērijas inokulē divās mēģenēs ar Simmona agaru. Atstājiet tās krāsnī 18 līdz 24 stundas 37 ° C temperatūrā. Agars sākotnēji ir zaļš, bet, ja jūsu baktērijas izmanto citrātu kā oglekļa avotu, krāsa mainīsies no zaļas uz zilu. Zils ir pozitīvs rezultāts. Ja caurules paliek zaļas, to baktērijas ir negatīvas, lietojot citrātu kā vienu oglekļa avotu.

6. Veic metilsarkano testu (MRVP). Šim testam ir nepieciešamas divas caurules, kas satur peptona, bufera un dekstrozes (vai glikozes) šķīdumu. Katru caurulīti inokulē ar nezināmām baktērijām un atkal uz plīts 18 līdz 24 stundas 37 ° C temperatūrā. Kad tas ir gatavs, pievienojiet mēģenei trīs pilienus metilsarkanā. Tas būs jūsu MR caurule. Ja caurule mainās no dzeltenas uz sarkanu, tā baktērija ir pozitīva un fermentācijas procesā izmanto jauktu skābes ceļu (tiek ražotas pienskābes, etiķskābes un skudrskābes). Otrajā mēģenē pievieno trīs pilienus VP reaģenta. Ja caurule kļūst sarkana, baktērijas ir pozitīvas, veidojot diacetilu, fermentācijas produktu. Ja caurule kļūst brūna, jūsu baktērija ir negatīva.

7. Atrodiet savas baktērijas, atzīmējot pozitīvos un negatīvos rezultātus.