Saturs

• Instrukcijas
• Kolonnas atjaunošana
• Kā
• Paziņojums
• Kas jums nepieciešams

Augstas veiktspējas šķidruma hromatogrāfija (HPLC) ir kopēja laboratorijas analīzes metode, kurā paraugs tiek sadalīts tā ķīmiskajās sastāvdaļās, kad tas iet caur kolonnu. Šī kolonna ir piepildīta ar porainu materiālu, parasti silikagelu. Standarta apgrieztās fāzes kolonna, tāpat kā C8, dažreiz var aizsprostoties vai piesārņoties. Šīs kolonnas var iegūt, izmantojot ļoti vienkāršus paņēmienus.

Instrukcijas

Labais šķīdinātājs var atgūt netīru kolonnu (Jupiterimages / liquidlibrary / Getty Images)

Kolonnas atjaunošana

1. Atvienojiet kolonnu un pagrieziet tās pozīciju tā, lai mobilā fāze tagad nonāktu caur to, kas parasti ir kolonnas izeja. Pievienojiet kolonnā otru galu (kas bija sākotnējais ieraksts) un ļaut tam iztecēt.

2. Sūkņu sērijas šķīdinātāju secība samazinās pēc polaritātes. Ieteicamā pamata sērija ir sākt ar metanolu, pēc tam pāriet uz acetonitrilu, tad acetonitrilu / izopropanolu (75:25), izopropanolu, metilēnhlorīdu un heksānu. Ja pārvietojamā fāze, kas bija kolonnā, bija absorbējošs, ieteicams izmantot ūdeni pirms tam metanolā. Pietiek ar plūsmu no viena līdz diviem mililitriem minūtē, un jāpiepumpē aptuveni desmit tilpuma kolonnas no katra šķīdinātāja. Tilpuma kolonna ir kolonnas iekšējā telpa, un to aprēķina (0,7 x pi x (DI / 2) ^ 2 x L), kur DI ir kolonnas iekšējais diametrs un L ir garums.

   
   

3. Ar kolonnu sūknē vēl 10 tilpumus izopropanola, lai to sagatavotu lietošanai ar sākotnējo pārvietojamo fāzi. Ja sākotnējā pārvietojamā fāze ir izlīdzināta, arī izspiediet ūdeni caur kolonnu pēc izopropanola pirms atgriešanās pie sākotnējās mobilās fāzes.

4. Atvienojiet kolonnu, pagrieziet to atpakaļ un atkal ieslēdziet tā, lai tā būtu sākotnējā stāvoklī (tā, lai kustamā fāze nonāk kolonnas labajā pusē). Pievienojiet skaļruņa izeju detektoram.

Kā

• Ja šis process kolonnu rūpīgi neiztīra, var izmantot 50:50 dimetil-sulfoksīda (DMSO) un dimetilformamīda (DMF) maisījumu. Olbaltumvielu un metāla jonu atliekām var būt nepieciešami citi šķīdinātāju veidi, piemēram, jonu taupošie reaģenti vai etilēndiamīna tetraetiķskābes (EDTA) šķīdums.

Paziņojums

• Dažās ierīcēs mugurkaulā būs neapstrādāts metāla siets kā ieplūde. Šādā gadījumā kolonnas atgriešana ļaus stacionārajai fāzei atstāt kolonnu, un tas nav ieteicams. Ja neesat pārliecināts, sazinieties ar izplatītāju.
• Šajā procesā izmantotais šķīdinātājs ir potenciāli toksisks, ja norīts un ieelpots. Lietojot, izmantojiet parastos laboratorijas piesardzības pasākumus.

Kas jums nepieciešams

• HPLC ierīce
• Ūdens
• Metanols
• Acetonitrils
• Izopropanols
• Metilēnhlorīds
• Heksāns