Saturs

• Šūnu sienu nojaukšana
• Lipīdu izņemšana
• Proteīnu noņemšana
• Nogulsnējoša DNS
• Attīroša DNS

Aukstu alkoholu lieto, lai atdalītu DNS no ūdens šķīdumiem, ļaujot to attīrīt turpmākajām ģenētiskajām pārbaudēm. Alkohola pievienošana šķīdumam, kas satur DNS, ir vienkāršs veids, kā padarīt to tīru pie zemākām temperatūrām un palēnināt fermentus, kas to pasliktina, dodot labākus ekstrakcijas rezultātus.

DNS izgulsnējas alkohola klātbūtnē (DNS attēls, ko Allyson Ricketts no Fotolia.com)

Šūnu sienu nojaukšana

Ekstrakcijas procedūrām tīras DNS iegūšanai ir jāatbrīvojas no visiem audu molekulārajiem un ķīmiskajiem komponentiem, no kuriem iegūst DNS. Pirmie soļi ietver šūnu sienu iznīcināšanu. To var izdarīt ar dažādām ķīmiskām vielām, kas ir kodīgas pret šūnu membrānām, bet nesabojā DNS. Šūnas var arī apstrādāt ar ultraskaņu, homogenizēt vai sasmalcināt, lai iznīcinātu membrānas.

Šūnu sienas ir jāiznīcina, lai sasniegtu DNS iekšpusē (šūnas 72 attēls ar chrisharvey no Fotolia.com)

Lipīdu izņemšana

Kad šūnu sienas ir iznīcinātas, tiek pievienots mazgāšanas līdzeklis, lai atbrīvotos no taukiem un eļļām, kas veido šūnu membrānas. Mazgāšanas līdzekļi izšķīst eļļas un taukus šķīdumā.

Proteīnu noņemšana

Olbaltumvielas un fermentus var sagremot, pievienojot šķīdumam proteāzi. Proteazes sadala proteīnus mazos peptīdos un aminoskābēs.

Nogulsnējoša DNS

Ledus auksta alkohola pievienošana šķīdumam nogulsnēs un sajauc DNS. Ģenētisko materiālu var savākt, centrifugējot paraugu un dekantējot šķidrumu. Tam vajadzētu būt kā neliela nogulsne centrifūgas mēģenes apakšā.

Attīroša DNS

DNS var mazgāt, atkārtoti suspendējot aukstā spirta šķīdumā un vairākas reizes centrifugējot, lai iegūtu ļoti tīru paraugu. Tipiski izmantotie spirti ir etanols un izopropanols. Šis process atstāj ļoti tīru paraugu stingros testos.