Saturs
Augstas veiktspējas šķidruma hromatogrāfija (HPLC) ir līdzeklis, ko izmanto, lai atdalītu vielas no maisījuma. Atsevišķu ķīmisko vielu atdalīšana un identificēšana notiek galvenokārt sistēmas hromatogrāfiskajā kolonnā. CLAE ir pieejami daudzi kolonnu veidi, un katrs no tiem tiek izmantots īpašam analīzes veidam. Kolonna C18 ir spēcīgākā parasti izmantotā nepolārā. Pēc ilgstošas ilgstošas lietošanas šķīdinātāja plūsmas ātrums caur to samazinās un analīzes laiks palielinās. Vēl viens analīzes laika samazināšanās iemesls ir tas, ka paraugiem ir neliels daudzums ķīmisko vielu kolonnas materiālā, samazinot spēju tos atdalīt. Tā virsmu var atjaunot, apstrādājot materiālu ar virkni īpašu šķīdinātāju, lai notīrītu to no visiem atlikušajiem paraugiem un atdzīvinātu nesošo materiālu.
1. solis
Noņemiet kolonnu C18 no plūsmas virziena un novietojiet to pretējā virzienā. Šķīdinātāja atgūšana caur to atvieglos akumulācijas efektu, kas rodas laika gaitā. Jāuzmanās, lai kolonnas galā nepaliktu pārāk daudz uzkrāto materiālu. Dažas rūpnīcas augšpusē izmanto lielāku sietu, lai, mainoties plūsmas virzienam, siets atrodas zemāk esošajā stāvoklī. Šo atjaunošanas metodi sauc par plūsmas maiņu. Lai novērstu uzkrāšanos no sistēmas detektora un, iespējams, radītu šķēršļus, ļaujiet tam darboties bez detektora pievienošanas un novirziet plūsmu no kolonnas uz iznīcināšanu.
2. solis
Ievietojiet šķīdinātāja cauruli virknē šķīdinātāju, lai eluētu jebkuru kolonnā paturēto savienojumu pretējā virzienā. Šie šķīdinātāji atšķiras pēc hidrofīlajām īpašībām. Mainot tos, jūs eluēsit tikpat daudzveidīga hidrofila rakstura savienojumus. Izmantojiet secīgi 50 ml katra no šiem šķīdinātājiem: ūdens (ja izmantojat buferšķīdumu), metanols, izopropanols, dihlormetāns, heksāns, dihlormetāns un izopropanols.
3. solis
Nomainiet kolonnu pareizajā virzienā un lieciet šķīdinātājam caur to plūst. Pirms turpināt, mazgājiet to vismaz 75 ml. Pārbaudiet to ar modeli, kuru izmantojāt, kad tas bija jauns, un pārbaudiet rezultātus. Pievērsiet uzmanību, sasniedzot maksimālos aiztures punktus un kopējo analīzes laiku. Pakāpe, kādā šie atribūti atbilst sākotnējam testam, kad tas vēl bija jauns, norādīs kolonnas atjaunošanas pakāpi. Ja rezultāti nav apmierinoši, nomainiet kolonnu ar jaunu un izmetiet veco.
